辣根過氧化物酶標記的小鼠抗人IgM

描述：辣根過氧化物酶標記的小鼠抗人IgM
HRP經(jīng)NaIO4氧化后形成的醛化酶可與抗體分子的氨基相連，形成斯夫氏鹼，后者可進一步用NaBH4（或乙醇胺）還原生成穩(wěn)定的酶標記抗體。

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廠商性質：生產(chǎn)廠家
更新時間：2020-06-22
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產(chǎn)品詳情/ PRODUCT DETAIL

標題：辣根過氧化物酶標記的小鼠抗人IgM

產(chǎn)品概述

辣根過氧化物酶標記的小鼠抗人IgM

本產(chǎn)品僅用于研究用途，不用于人類、治療或診斷應用。

抗體來源	Mouse
克隆類型	Polyclonal
交叉反應	hu
產(chǎn)品應用	WB=1:1000-10000 ELISA=1:1000-10000 IHC-P=1:100-1000 IHC-F=1:100-1000 not yet tested in other applications. optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
分子量	900kDa
性狀	Lyophilized or Liquid
濃度	2mg/1ml
免疫原	Full length plasma protein:
亞型	IgG
純化方法	affinity purified by Protein A
儲存液	0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件	Storage: Store at –20 oC for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20oC. When reconstituted in sterile distilled water or diluent supplied, theantibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

辣根過氧化物酶標記的小鼠抗人IgM

經(jīng)典的過碘酸鈉法中需采用二硝基氟苯封閉HRP上殘留的α-和ε氨基基以避免酶分子之間的交聯(lián)。后來Wilson等改用在低PH下使NaIO4氧化HRP，從而省去了二硝基氟苯封閉HRP步驟。HRP經(jīng)NaIO4氧化后形成的醛化酶可與抗體分子的氨基相連，形成斯夫氏鹼，后者可進一步用NaBH4(或乙醇胺)還原生成穩(wěn)定的酶標記抗體。

主要試劑

1. 0.1M NaIO4：稱取241mg高碘酸鈉(廣州化學試劑廠，批號830602)溶于蒸餾水10ml中。

2. 1mM PH4.4醋酸鈉緩沖液：0.2M NaAc (1.361克/50ml) 3.7ml；0.2M HAc (0.601ml/50ml) 6.3ml；加蒸餾水至2,000ml。

3. 0.2M PH9.5碳酸鹽緩沖液：Na2CO3 0.32g；NaHCO3 0.586g；加蒸餾水至50ml，再用蒸餾水作20倍稀釋，即成0.01M PH9.5的碳酸鹽緩沖液。

4. NaBH4溶液(4mg/ml)：臨用時稱取NaBH4 4mg溶于1ml蒸餾水中。

5. 其它的試劑及器材可參見戊二醛標記法。

實驗步驟

1. 稱取5mgHRP溶解于1ml蒸餾水中。

2. 于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液，室溫下避光攪拌20分鐘。

3. 將上述溶液裝入透析袋中，對1mM PH4.4的醋酸鈉緩沖液透析，4℃過夜。

4. 加20μl 0.2M PH9.5碳酸鹽緩沖液，使以上醛化桯RP的PH升高到9.0-9.5，然后立即加入10mg IgG(抗體，或SPA 5mg)在1ml 0.01M碳酸鹽緩沖液中，室溫避光輕輕攪拌2小時。

5. 加0.1ml新配的4mg/ml NaBH4液，混勻，再置4℃ 2小時。

6. 將上述液裝入透析袋中，對0.15M PH7.4 PBS透析，4℃過夜。

7. 在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，置4℃ 1小時。

8. 3000rpm離心半小時，棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次，ZUI后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。

9. 將上述溶液裝入透析袋中，對0.15M PH7.4的PBS緩沖鹽水透析，去除銨離子后(用萘氏試劑檢測)，10,000rpm離心30分鐘去除沉淀，上清液即為酶結合物，分裝后，冰凍保存。

10. 結果判定

除標記物IgG量的計算，略有不同以外，其余均同戊二醛法。

IgG量(mg/ml)＝(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62

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