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描述:二抗:可以和一抗結合,并帶有可以被檢測出的標記(如帶熒光、放射性、化學發(fā)光或顯色基團),作用是檢測一抗。HRP標記的羊抗豚鼠IgG
標題:HRP標記的羊抗豚鼠IgG
產品概述
HRP標記的羊抗豚鼠IgG
本產品僅用于研究用途,不用于人類、治療或診斷應用。
抗體來源 | Goat |
克隆類型 | Polyclonal |
交叉反應 | Gpig |
產品應用 | WB=1:1000-10000 ELISA=1:1000-10000 IHC-P=1:100-1000 IHC-F=1:100-1000 not yet tested in other applications. optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user. |
分 子 量 | 150kDa |
性 狀 | Lyophilized or Liquid |
濃 度 | 2mg/1ml |
免 疫 原 | Full length plasma protein: |
亞 型 | IgG |
純化方法 | affinity purified by Protein A |
儲 存 液 | 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol. |
保存條件 | Storage: Store at –20 oC for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20oC. When reconstituted in sterile distilled water or diluent supplied, theantibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C. |
HRP標記的羊抗豚鼠IgG
一、戊二醛二步法
1. 原理
戊二醛為一種雙功能試劑,通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價結合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白結合物。
2. 標記步驟
(1)稱取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中,于室溫靜置過夜。
(2)反應后的酶溶液經Sephadex G-25層析柱,用生理鹽水洗脫。流速控制在1ml/1分鐘,收集棕色流出液。如體積大于5ml,則以PEG濃縮至5ml。放置25ml小燒杯中,緩慢攪拌。
(3)將待標記的抗體12.5mg用生理鹽水稀釋至5ml,攪拌下逐滴加入酶溶液中。
(4)用1M PH9.5碳酸緩沖液0.25ml,繼續(xù)攪拌3小時。
(5)加0.2M賴氨酸0.25ml,混勻后,置室溫2小時。
(6)在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨,置4℃ 1小時。
(7)3000rpm離心半小時,棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次,zui后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。
(8)將上述溶液裝入透析袋中,對0.15M PH7.4的PBS緩沖鹽水透析,去除銨離子后(用萘氏試劑檢測),10,000rpm離心30分鐘去除沉淀,上清液即為酶結合物,分裝后,冰凍保存。
3. 結果判定
(1)定性及效價滴定:用特異性抗原(或抗體)同酶標記抗體(或抗免疫球蛋白抗體)作雙向瓊脂擴散試驗或免疫電泳試驗。然后用酶的底物使沉淀弧顯色,可初步鑒定其活性。zui后以直接ELISA法(或在正式實驗系統(tǒng)里)對酶結合物進行滴定( 見本節(jié) (三)工作濃度的選擇)。
(2)定量和克分子比值測定:可用分光光度計測定(光程1cm)。
酶量(mg/ml)=OD403nm×0.4
IgG量(mg/ml)=(OD280nm-OD403nm×0.42)×0.94×0.62
(3)本法標記步驟比較簡單,重復性好。缺點是酶的利用率低,一般只有2-4%的酶與蛋白質結合。
4. 試劑及器材
(1)0.1M PH6.8磷酸緩沖鹽水(PBS):取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M NaH2PO4 51ml,NaCl1.8克,加蒸餾水至200ml。
(2)1.25%戊二醛液:取25%戊二醛50ml與PH6.8的PBS 1ml混合。
(3)1M PH9.5碳酸鹽緩沖液:取1M碳酸鈉3ml與1M碳酸氫鈉7ml混合。
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