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描述:一抗是針對(duì)抗原的抗體,二抗是針對(duì)一抗的抗體。即抗體也可以充當(dāng)抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體。HRP標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG
標(biāo)題:HRP標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG
產(chǎn)品概述
免疫球蛋白G(IgG)是血清中含量豐富的蛋白質(zhì)之一,在成人血液中的含量在8-17mg/mL之間。IgG對(duì)我們抵抗微生物很重要,分子是由B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的,是我們適應(yīng)性免疫反應(yīng)的一部分。IgG分子有兩個(gè)獨(dú)立的功能:與引起應(yīng)答的病原體結(jié)合,并招募其他細(xì)胞和分子破壞抗原。IgG池的變異性是通過體細(xì)胞重組產(chǎn)生的,在給定的時(shí)間點(diǎn)個(gè)體的特異性數(shù)量估計(jì)為1011個(gè)變異。
重要提示:
本產(chǎn)品僅用于研究用途,不用于人類、治療或診斷應(yīng)用。
HRP標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG
抗體來源 | Rabbit |
克隆類型 | Polyclonal |
交叉反應(yīng) | Gpig |
產(chǎn)品應(yīng)用 | WB=1:1000-10000 ELISA=1:1000-10000 IHC-P=1:100-1000 IHC-F=1:100-1000 not yet tested in other applications. optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user. |
性 狀 | Lyophilized or Liquid |
濃 度 | 2mg/1ml |
免 疫 原 | Full length plasma protein: |
亞 型 | IgG |
純化方法 | affinity purified by Protein A |
儲(chǔ) 存 液 | 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol. |
保存條件 | Storage: Store at –20 oC for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20oC. When reconstituted in sterile distilled water or diluent supplied, theantibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C. |
1. DAB是辣根過氧化物酶敏感、常用的底物。它產(chǎn)生強(qiáng)烈的棕色產(chǎn)物,在水和醇中不溶解。多數(shù)情況下,推薦在DAB中加入不同的金屬離子。當(dāng)加入金屬鹽如鈷、鎳至底物液中,辣根過氧化物酶可以更加敏感。此類反應(yīng)產(chǎn)物呈暗藍(lán)灰色至黑色,且在水及醇中穩(wěn)定。DAB/金屬鹽染色應(yīng)用的組織染色范圍較廣。
2. 氯萘酚可以形成一種藍(lán)黑色產(chǎn)物。敏感性低于DAB,且產(chǎn)物可溶于醇中。它適用于當(dāng)DAB反應(yīng)形成較高背景或要求改變產(chǎn)物的顏色。
3. AEC產(chǎn)生紅色產(chǎn)物,其敏感性低于DAB,但可用于DAB反應(yīng)產(chǎn)生較高背景或要求改變產(chǎn)物顏色的試驗(yàn)。此產(chǎn)物可溶于醇,但不溶于水。
主要試劑
1. DAB需要的溶液
DAB,0.05mol/LTris緩沖液(pH7.6);
0.3%(W/V)氯化鎳/水貯存液;
30%過氧化氫;
DPX。
HRP標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG
2. 氯萘酚需要的溶液
0.03%氯萘酚,用無水乙醇溶解(貯存在-20℃),0.05mol/LTris(pH7.6)
過氧化氫;
Gelvatol或者M(jìn)owiol。
3. AEC需要的溶液
0.4%AEC用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解;
0.1mol/L乙酸鈉緩沖液(pH5.2);
過氧化氫;
Gelvatol或Mowio1。
主要設(shè)備
光學(xué)顯微鏡(通常帶有照相機(jī)以便于記錄結(jié)果)。
實(shí)驗(yàn)步驟
1.DAB操作步驟
1) 用9ml 0.05mol/LTris緩沖液(pH7.6)溶解6mgDAB;
2) 加lml0.3%(W/V)氯化鎳/水貯存液(也可以用等量的氯化鈷替代);
3) 加0.1 m1 3%過氧化氫。過氧化氫一般以30%的溶液提供,貯存在4℃,此條件可以持續(xù)1個(gè)月;
4) 如果出現(xiàn)沉淀,用濾紙過濾;
5) 加此溶液至標(biāo)本,并孵育1-20min水洗終止反應(yīng);
6) 優(yōu)化:如果需要可復(fù)染;
7) 用DPX封片。
2.氯萘酚操作步驟
1) 氯萘酚貯存液的準(zhǔn)備:用10ml無水乙醇溶解0.3g氯萘酚,貯存于-20℃;
2) 加100ul氯萘酚貯存液至10ml 0.05mol/LTris(pH7.6),
3) 加0.1ml 3%過氧化氫于水中。過氧化氫一般是以30%的溶液提供,4℃可存放1個(gè)月;
4) 白色沉淀可用濾紙過濾去除;
5) 加此溶液到標(biāo)本中,并在室溫孵育10~40min,水洗終止反應(yīng);
6) 優(yōu)化:如果需要,進(jìn)行復(fù)染,但只可使用水溶性染料;
7) 用Gelvatol或者M(jìn)owiol封片。
3.AEC操作步驟
1) 用lmlDMF溶解4mgAEC。AEC在DMF中穩(wěn)定,因此,可以用100mlDMF溶解0.4gAEC作為貯存液備用;
2) 加lmlAEC溶液至15ml 0.1mol/L的乙酸鈉緩沖液(pH5.2)中,并攪拌;
3) 加0.15ml 3%過氧化氫于水中。過氧化氫一般是30%的溶液提供,在4℃可存放1個(gè)月;
4) 用濾紙過濾;
5) 加此溶液到標(biāo)本中,并于室溫孵育10~40min,水洗終止反應(yīng);
6) 優(yōu)化:如果需要復(fù)染,只可用水溶性染料;
7) 用Gelvatol或Mowiol封片。
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