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描述:測定原理:LPL和HL均能水解乳劑中TG,生成游離脂肪酸;進一步通過銅試劑法測定體系中游離脂肪酸的生成。脂蛋白酯酶(LPL)&肝脂酶(HL)檢測試劑盒
標題:脂蛋白酯酶(LPL)&肝脂酶(HL)試劑盒
產(chǎn)品概述
脂蛋白酯酶(LPL)&肝脂酶(HL)檢測試劑盒
測定意義:
LPL(lipoprotein lipase)存在于肝外組織毛細血管內(nèi)皮細胞表面,催化血漿中乳糜微粒(CM)和極低密度脂蛋白(VLDL)中甘油三酯(TG)的水解,在CM及VLDL的降解中發(fā)揮重要作用。HL(hepatic lipase)僅存在于肝內(nèi)皮細胞表面,在中密度脂蛋白(IDL)和高密度脂蛋白(HDL)代謝中起重要作用。LPL 和HL活性降低,可引起高甘油三酯血癥。在高脂血癥、動脈粥樣硬化的發(fā)病機理及脂蛋白代謝研究中,常常需要測定LPL及HL活性。
自備儀器和用品:
研缽、冰、臺式離心機、微量注射器、可見分光光度計/、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、肝素鈉、氯fang(三氯jia 烷)、無水乙醇和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,室溫保存。
試劑三:自備。實驗前1 d,在10 mL試劑瓶中加入4.8 mL正庚烷,0.2 mL無水甲醇,5 mL氯fang(自備),蓋緊后混勻,室溫保存。
試劑四:液體×1瓶,室溫保存。
試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前向試劑瓶中加入5 mL無水乙醇,充分溶解。
標準品:粉劑×1瓶,室溫保存。臨用前向試劑瓶中加入7.8 mL氯fang充分溶解,即為500μmol/L的棕櫚酸標準溶液。
粗酶液提取:
1、血液中LPL與HL活性測定:按動物體重,150U/kg肝素鈉溶液靜脈注射,20min后取血液,即下表中粗酶液,待測。
2、組織中LPL與HL活性測定:組織用生理鹽水沖洗干凈后,用吸水紙吸取表面水分,稱取約0.1 g樣品,加入1 mL生理鹽水,冰浴勻漿,8000rpm,4℃離心10min,取上清液,即粗酶液,待測。
LPL和HL測定操作:
1. 分光光度計預熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長到550 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管:取帶蓋 玻璃試管,加入2 μL蒸餾水,100μL試劑三,40 μL試劑四,40μL試劑五,蓋緊后充分震蕩混勻(2min),倒入微量石英比色皿/96孔板,靜置15min,于550nm光吸收,記為A空白管。
3. 標準管:取帶蓋 玻璃試管,加入2 μL標準液,100μL試劑三,40 μL試劑四,40μL試劑五,蓋緊后充分震蕩混勻(2min),倒入微量石英比色皿/96孔板,靜置15min,于550nm光吸收,記為A標準管。
4. 總脂酶測定管:取帶蓋玻璃試管,加入10 μL粗酶液,100μL蒸餾水,100μL試劑二,蓋緊后混勻;37℃水浴準確保溫60min;吸取2μL上述溶液,加入另一個0.5mL EP管,加入100μL試劑三,40 μL試劑四,40μL試劑五,蓋緊后充分震蕩混勻(2min),倒入微量石英比色皿/96孔板,靜置15min,于550nm光吸收,記為A總脂酶管。
5. 肝脂酶測定管:取帶蓋玻璃試管,加入10 μL粗酶液,100μL試劑一,100μL試劑二,蓋緊后混勻;37℃水浴準確保溫60min;吸取2μL上述溶液,加入另一個0.5mL EP管,加入100μL試劑三,40 μL試劑四,40μL試劑五,蓋緊后充分震蕩混勻(2min),倒入微量石英比色皿/96孔板,靜置15min,于550nm光吸收,記為A肝脂酶管。
脂蛋白酯酶(LPL)&肝脂酶(HL)檢測試劑盒
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