標題：線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒

產品概述

線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒

測定意義

復合體Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱NADH-CoQ 還原酶或NADH脫氫酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中，是線粒體內膜中大的蛋白復合物。該酶催化一對電子從NADH傳遞給CoQ，同時可使O₂還原生成O^2.-，是呼吸電子傳遞鏈上產生O^2.-的主要部位。測定該酶活性，不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態(tài)，而且可以反映活性氧（ROS）生成狀態(tài)。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一：25mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：5mL×1瓶，-20℃保存；

試劑三：0.5 mL×1瓶，-20℃保存；

試劑四：25mL×1瓶，-20℃保存；

試劑五：1 mL×1支，-20℃保存；

試劑六：粉劑×1支，-20℃保存，用時加入2mL雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存。

工作液的配制：臨用前將試劑五轉移到試劑四中混合溶解。

復合體Ⅰ的提取：

• 準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
• 4 ℃ 600 g離心5min。
• 將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心10min。
• 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅰ（此步可選做）。
• 在沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于復合體Ⅰ酶活性測定。

測定步驟：

1. 調零

用蒸餾水于340nm處調零。

1. 樣本測定

（1）取40μL酶液和800μL工作液加入1mL玻璃比色皿，在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min。

（2）取出比色皿，加入60μL試劑六，混勻；立即記錄340nm處初始吸光值A1，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）中準確反應2min，記錄340nm處2min后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。

線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒