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描述:測(cè)定原理:γ-GT催化谷氨酰對(duì)硝基苯胺中γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移給N-甘氨酰甘氨酸,生成對(duì)硝基苯胺,在405nm有特征光吸收;通過(guò)測(cè)定405nm光吸收增加速率,來(lái)計(jì)算γ-GT酶活性。γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)活性檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)活性檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)活性檢測(cè)試劑盒
測(cè)定意義:
γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關(guān)鍵酶,催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨?;衔锷系?/span>γ-谷氨?;D(zhuǎn)移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨?;衔锏乃?,產(chǎn)生谷氨酸鹽,在細(xì)胞外谷胱甘肽新陳代謝中起了重要的作用。
自備儀器和用品:
低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃保存。
試劑四:液體×1瓶,4℃保存。
工作液(在試劑二瓶中配制):臨用前配制,把試劑三倒入試劑二瓶中,充分溶解(室溫過(guò)低時(shí)可以40℃水浴促進(jìn)溶解);然后把試劑四倒入試劑二瓶中,混勻后室溫保存。
粗酶液提取:
稱(chēng)取約0.1g樣品,加試劑一1 mL充分研磨,于4℃,10000rpm離心15min,取上清液待測(cè)。
γ-GT測(cè)定操作
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到405 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動(dòng)物)水浴中預(yù)熱30min以上(保證無(wú)沉淀)。
3. 測(cè)定管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL上清液,180μL工作液,混勻后于405nm測(cè)定10s和70s時(shí)吸光度,記為A1和A2。
回歸方程:
分別配制濃度為0、20、40、60、80、100μmol/L的對(duì)硝基苯胺溶液,于405nm比色,記錄其吸光值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算得標(biāo)準(zhǔn)曲線公式為:y=0.006x+0.0016,x為對(duì)硝基苯胺濃度,y為吸光值,R2=0.999。
γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)活性檢測(cè)試劑盒
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