標(biāo)題：Na+k+——ATP酶檢測試劑盒

產(chǎn)品概述

Na+k+——ATP酶檢測試劑盒

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 5ml×1 瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×3 支，-20℃保存。用時每支加1mL蒸餾水，現(xiàn)用現(xiàn)配。用不完的試劑-20℃可保存一周。

試劑五：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑六：粉劑×1 瓶，4℃保存。用時加入3mL雙蒸水， 4℃保存。

試劑七：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入25mL雙蒸水，溶解后4℃保存一周。

試劑八：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入25mL雙蒸水，溶解后4℃保存一周。

試劑九： 液體 25mL×1 瓶，室溫保存。

試劑十：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。

0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：將貯備液 20倍稀釋，即取 0.1mL試劑十加1.9mL蒸餾水充分混勻。

定磷劑的配制：按H2O: 試劑七:試劑八:試劑九=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。

樣品酶液的制備：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

操作步驟

1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至660nm，蒸餾水調(diào)零。

2、酶促反應(yīng)（在EP管中加入下列試劑）

混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）準(zhǔn)確水浴10min

混勻，4000g，常溫離心10min，取上清液

3定磷(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑)

混勻，37℃水浴 30 min，冷卻至室溫，在 660nm處比色。

注意：

1、A管為對照管；B管為Na⁺K⁺-ATP酶測定管；

2、由于每一個樣都必須做對照，本試劑盒50管保證測 24份Na⁺K⁺-ATP酶。

3、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴(yán)格無磷。

4、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管。

Na+k+——ATP酶檢測試劑盒