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顯色基質鱟試劑盒新品推薦

更新時間:2020-11-25      瀏覽次數:419

顯色基質鱟試劑盒新品推薦

 

顯色基質鱟試劑 ( Chromogenic End-point Tachypleus Amebocyte Lysate , CE TAL )用于體外細菌內毒素的定量檢測,禁止以任何途徑進入機體。

 

【原理】鱟試劑為鱟科動物東方鱟的血液變形細胞溶解物的冷凍干燥品,鱟試劑中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在適宜的條件下(溫度,pH 值及無干擾物質),細菌內毒素激活 C 因子,引起一系列酶促反應,激活凝固酶原形成凝固酶,凝固酶分解人工合成的顯色基質,使其分解為多肽和黃色的對硝基苯胺(pNA,λmax = 405nm) 。在一定時間內,pNA 的 生成量與細菌內毒素濃度成正關,據此,可以定量供試品的內毒素濃度。同時,對硝基苯胺(pNA)也可用偶氮化試劑染成玫瑰紅色(λmax = 545nm),避免了供試品本身的顏色對 405nm 處吸收峰的干擾。

 

鱟試劑:按標示量加細菌內毒素檢查用水于鱟試劑中,輕輕振搖使鱟試劑*溶解, 注意不要用旋渦混勻儀激烈振搖。溶解的鱟試劑應在 10 分鐘內用完。 顯色基質:按標示量加細菌內毒素檢查用水于顯色基質中,輕輕振搖使顯色基質*溶解。顯色基質溶液可在無污染的條件下于 4 ºC 貯存 8 小時以內。

偶氮化試劑 1:按標示量加反應終止劑鹽酸于偶氮化試劑 1 中,
偶氮化試劑 2:按標示量加細菌內毒素檢查用水于偶氮化試劑 2 中,
偶氮化試劑 3:按標示量加細菌內毒素檢查用水于偶氮化試劑 3 中,
偶氮化試劑溶液可于 4ºC 貯存 1 周。 3.4 實驗操作 取無熱原試管,加入 100μl 細菌內毒素檢查用水、內毒素標準溶液,或供試品。再加入 100μl 鱟試劑溶液,混勻,37ºC 溫育 T1分鐘。 溫育結束,加入 100μl 顯色基質溶液,混勻,37ºC 溫育 T2分鐘。 溫育結束,加入 500μl 偶氮化試劑 1 溶液,混勻, 加入 500μl 偶氮化試劑 2 溶液,混勻 加入 500μl 偶氮化試劑 3 溶液,混勻,靜置 5 分鐘,于 545nm 波長處讀取吸光度值。

 

【供試品的干擾試驗】 供試品的干擾試驗詳見《中華人民共和國藥典》2005 版中《細菌內毒素檢查法》的 “光度測定法干擾試驗”。

當鱟試劑、供試品的來源、配方、生產工藝改變或試驗環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗結果的變化時,須進行干擾試驗,步驟如下: 
1 選擇標準曲線中點或一個靠近中點的內毒素濃度(設為 λm),作為供試品干擾試驗中添加的內毒素濃度,配制含 λm 內毒素的供試品陽性對照,測量出該溶液的內毒素濃度,稱為 Cs;
2 測量出未添加外源內毒素的供試品溶液內毒素濃度,稱為 Ct;
3 計算該試驗條件下的回收率 R=(Cs–Ct)/λm×100
4 當 R 在 50%~200%之間,則認為在此試驗條件下供試品溶液不存在干擾作用。
5 當 R 在 50%~200%之外,需對供試品進行系列稀釋(稀釋倍數不得超過有效稀釋倍數 MVD)或進行其它處理消除干擾,每一稀釋溶液都重復步驟 1-3,直到內毒素的回收率 R 在 50%~200%之間。選擇回收率 R 接近 100的稀釋倍數進行內毒素檢測。

 

 

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