中性紅染色液使用原理！

中性紅是一種弱堿性pH指示劑，變色范圍在pH6.4～8.0之間(由紅變黃)。分子式為C15H16N4.HCl，分子量為288.78。在中性或微堿性環(huán)境中，植物的活細(xì)胞能大量吸收中性紅并向液泡中排泌。由于液泡在一般情況下呈酸性反應(yīng)，因此，進(jìn)入液泡的中性紅便解離出大量陽(yáng)離子而呈現(xiàn)櫻桃紅色，在這種情況下，原生質(zhì)和細(xì)胞壁一般不著色。死細(xì)胞由于原生質(zhì)變性凝固，細(xì)胞液不能維持在液泡內(nèi)，用中性紅染色后，不產(chǎn)生液泡著色現(xiàn)象，相反，中性紅的陽(yáng)離子，卻與帶有一 定負(fù)電荷的原生質(zhì)及細(xì)胞核結(jié)合，而使原生質(zhì)與細(xì)胞核染色。

細(xì)胞對(duì)中性紅的攝入取決于細(xì)胞對(duì)pH梯度的維持能力，而這種能力是通過(guò)產(chǎn)生ATP來(lái)維持的。在生理pH條件下，中性紅染料的凈電荷幾乎為零，從而使其能通過(guò)非離子被動(dòng)擴(kuò)散的方式穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞。溶酶體(lysosomes)中的質(zhì)子梯度使溶酶體中的pH值低于細(xì)胞質(zhì)，從而可以使中性紅帶上電荷并在溶酶體中積累。在細(xì)胞增殖加快時(shí)，細(xì)胞數(shù)量增多，可以攝入的中性紅的量就會(huì)增加。在細(xì)胞受到損傷時(shí)，中性紅的攝入能力會(huì)下降。經(jīng)過(guò)一定時(shí)間攝入后，細(xì)胞經(jīng)清洗并用裂解液裂解即可釋放中性紅而用于檢測(cè)。這樣通過(guò)測(cè)定細(xì)胞對(duì)于中性紅的攝入量，就可以確定細(xì)胞的增殖或毒性情況。