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細(xì)胞內(nèi)鐵離子檢測(cè)原理!
鐵是人體必需的元素之一,對(duì)人體的新陳代謝和身體健康具有重要作用,血液中鐵的含量不足,就 會(huì)造成缺鐵性貧血。鐵存在于人體所有的細(xì)胞內(nèi),各組織、器官包括各內(nèi)分泌腺都含有鐵。肝臟、脾臟和 肺組織內(nèi)含量較為豐富。成人體內(nèi)含鐵 3~5 克,大部分都以蛋白質(zhì)復(fù)合物形式存在,極少部分以離子的 形態(tài)存在。本試劑盒采用亞鐵嗪比色法可以定量細(xì)胞鐵離子,線(xiàn)性范圍 5~300uM。產(chǎn)品包括標(biāo)準(zhǔn)品和空 白對(duì)照,本試劑盒可進(jìn)行 100 個(gè)樣品的檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng):細(xì)胞內(nèi)鐵離子檢測(cè)試劑盒
規(guī)格:100T
儲(chǔ)存:4℃保存
有效期:6個(gè)月
實(shí)驗(yàn)步驟:
樣品準(zhǔn)備(以 24 孔板為例): 將含鐵元素 DMEM 培養(yǎng)過(guò)的細(xì)胞用冷的 PBS 2ml 洗兩遍,將 PBS 吸棄(若不馬上檢測(cè)可將其凍存于 -20℃)。200ul/孔裂解液裂解細(xì)胞,置于搖床裂解 2h。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)河迷噭┖刑峁┑南♂層靡簩?3mM 的標(biāo)準(zhǔn)品母液稀釋為:300 uM、150uM、75uM、 37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀釋并設(shè)置 0 濃度對(duì)照反應(yīng)管。
將緩沖液與 4.5%高錳酸鉀溶液按 1:1 混勻,稱(chēng)為混液 A。 注意:高錳酸鉀溶液需要自備。
參考下表使用 1.5ml 離心管,設(shè)置空白對(duì)照管、標(biāo)準(zhǔn)品管和樣品管。如果樣品中的鐵元素含量過(guò)高, 用裂解液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。
空白對(duì)照 稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品 裂解的樣品
稀釋用液 100μl -
混液 A 100μl 100μl 100μl
樣品 - - 100μl
標(biāo)準(zhǔn)品工作液 - 100μl -
5. 混勻,60℃ 孵育 1h。
6. 冷卻至室溫,將管蓋與管壁上的液滴離心入管底。
7. 加入 30ul 鐵離子檢測(cè)劑,混勻,室溫孵育,30min。
8. 取 200ul 于 96 孔板,在 550nm 測(cè)定吸光度。如果不能測(cè)定 550nm,也可以在 540nm~580nm 范圍內(nèi)檢測(cè)。
9. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并計(jì)算鐵離子濃度。
注意事項(xiàng):
1.操作過(guò)程中,樣品與試劑等避免與鐵器接觸,以防污染。
2.為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,檢測(cè)試劑有腐蝕性,請(qǐng)小心操作,若不慎沾到 皮膚上請(qǐng)馬上用清水沖洗干凈。
3.本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其它用途!
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