測(cè)試大腸桿菌的方法

一、檢測(cè)方法特點(diǎn)：與國標(biāo)法中的九管法相對(duì)應(yīng)，將原來幾步的試驗(yàn)簡化為一步，時(shí)間由78h縮短為24h以內(nèi)，省去了制備培養(yǎng)基、消毒和培養(yǎng)器皿的清洗處理等大量輔助性工作，隨時(shí)可以打開包裝進(jìn)行抽樣檢測(cè)。注意事項(xiàng)：如果樣品的酸堿度在pH7以下，應(yīng)先用滅菌1mol/L氫氧化鈉(NaOH)調(diào)節(jié)溶液調(diào)至中性，避免因pH的原因?qū)е碌募埰凕S而影響結(jié)果觀察。

二、快速檢驗(yàn)方法的原理：將乳糖、顯色劑和選擇性培養(yǎng)基加載在紙片上，經(jīng)培養(yǎng)后能夠在紙片上生長并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸的即為大腸菌群陽性，記錄每個(gè)稀釋度大腸菌群陽性紙片數(shù)，根據(jù)大腸菌群MPN表查出相應(yīng)的大腸菌群數(shù)。

三、快速檢驗(yàn)操作方法：

方法（1）1樣品處理：無菌稱取樣品25g(或25mL)放入含有225mL滅菌生理鹽水的采樣瓶或均質(zhì)杯中，經(jīng)充分振搖做成1：10的樣品勻液，用1mL滅菌吸管吸取1：10樣品勻液，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖試管制成1：100的稀釋液。以此類推，每個(gè)稀釋度更換一支滅菌吸管。2接種：選取兩個(gè)稀釋度進(jìn)行接種，普通食品一般采用1：10和1：100這兩個(gè)稀釋度，飲料和飲用水采用原液和1：10兩個(gè)稀釋度。每份由三片大紙片(接10mL),六片小紙片(接1mL)組成,大片每小袋二張疊放算作一片。用滅菌吸管吸取10 mL 1：10稀釋液加到含有大紙片的塑料袋中(相當(dāng)于接樣品1g)，吸透后平放，做三個(gè)重復(fù)。再用1mL滅菌吸管吸取1 mL同一稀釋液涂布到含有小紙片的塑料袋中(相當(dāng)于接樣品0.1g)，做三個(gè)重復(fù)。再取一支1 mL滅菌吸管吸取1 mL 1：100稀釋液涂布到含有小紙片的塑料袋中(相當(dāng)于接樣品0.01g)，做三個(gè)重復(fù)。3 培養(yǎng)：將接種好的紙片(可疊放)放入37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15h～24h。

方法（2） 1取樣接種：用滅菌吸管吸取10mL水樣插入裝有大紙片的塑料薄膜袋中，均勻涂布，共做5個(gè)重復(fù);分別取1mL水樣加到小紙片中，共接5個(gè)重復(fù);另取1mL水樣加到9mL無菌水中混勻，用1mL滅菌吸管分別吸取1mL(即0.1mL水樣),加到zui后5片小紙片中。2培養(yǎng)：將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)15h。3結(jié)果判斷：觀察每片顏色變化，若紙片保持紫藍(lán)色不變?yōu)榇竽c菌群陰性，紙片變黃或在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)或片狀紅暈為陽性。4報(bào)告結(jié)果：根據(jù)每個(gè)稀釋度的陽性反應(yīng)紙片數(shù)，查MPN表可得出水樣中大腸桿菌的MPN值。

四、數(shù)據(jù)結(jié)果判斷與計(jì)數(shù)分析：若紙片變黃或在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)為大腸菌群陽性紙片。紙片保持紫蘭色不變或在紫蘭色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)，但周圍沒有黃色均為大腸菌群陰性紙片。記錄每個(gè)稀釋度大腸菌群陽性紙片數(shù)，根據(jù)大腸菌群MPN表查出相應(yīng)的大腸菌群數(shù)。如接種的第-一個(gè)稀釋度的稀釋液為原液，應(yīng)將表上查出的結(jié)果除以10，以此類推。

五、食品大腸桿菌檢驗(yàn)適用范圍：適用于各類食品、飲用水、原料和純凈水等樣品中大腸菌群的快速測(cè)定和快速計(jì)數(shù)。