99精品热在线在线观看视频_久久午夜色播影院_俺也去精品视频在线观看_亚洲中心精品国产一区

技術(shù)文章

我的位置:首頁(yè)  >  技術(shù)文章  >  RTS BL21(DE3)表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞使用方法

RTS BL21(DE3)表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞使用方法

更新時(shí)間:2023-05-18      瀏覽次數(shù):253

RTS BL21(DE3)表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞使用方法


RTS(Room Temperature Stable)系列感受態(tài)細(xì)胞,其室溫可保存3天、-20°C可保存2年(推薦保存溫度)、-80°C可長(zhǎng)期保存性能無(wú)下降。運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需干冰,可常規(guī)冰袋運(yùn)輸(推薦運(yùn)輸溫度)。RTS表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞均為熱激感受態(tài)細(xì)胞,轉(zhuǎn)用于蛋白表達(dá)(不可用于克隆和載體構(gòu)建),經(jīng)42°C熱激1min可獲得105~106cfu/μg效價(jià),可滿足質(zhì)粒轉(zhuǎn)化要求。該制品使用簡(jiǎn)單、運(yùn)輸、儲(chǔ)存方便。


使用方法

 1. 從-20°C冰箱中取出Nano E.coli Transfection Reagent融化,放置于冰上。

注意:該試劑含長(zhǎng)鏈帶電化合物,允許反復(fù)凍融20次,使用完畢后繼續(xù)-20°C保存。

2. 取50 μl Nano E.coli Transfection Reagent置于0.2 ml EP管中,加入10~100 ng質(zhì)粒DNA(不可使用連接產(chǎn)物),槍頭吹打混合均勻,冰上放置2min。

注意:放置時(shí)間不要超過(guò)30min,過(guò)長(zhǎng)時(shí)間會(huì)導(dǎo)致核酸聚合,從而影響轉(zhuǎn)化效價(jià)。

3. 將上述混合物(50 μl Nano E.coli Transfection Reagent和質(zhì)粒DNA)加入到一支RTS表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞干粉中,槍頭輕輕吹打,溶解細(xì)胞干粉,置于冰上15min。

注意:使用RTS 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞干粉,輕甩干粉至管底部,如果發(fā)現(xiàn)干粉已經(jīng)溶解則不可使用。

4. 置于42°C熱激1min后,迅速置于冰上急冷2min。

5. 將熱激完畢的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有450 μl不含抗生素的SOC(或LB)培養(yǎng)基,37°C振蕩(225 rpm)培養(yǎng)60min。使質(zhì)粒上抗性標(biāo)記基因表達(dá),菌體復(fù)蘇。

6. 取200 μl復(fù)蘇菌液涂布到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂平板表面。

7. 將平板置于37°C培養(yǎng),12~18小時(shí)后可出現(xiàn)菌落。

8. 獲得的表達(dá)菌,可使用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),從而獲得重組蛋白。 


  • 企業(yè)名稱(chēng):

    南京億迅生物科技有限公司

  • 聯(lián)系電話:

    025-65010873

  • 公司地址:

    江蘇省南京市江寧高新園

  • 企業(yè)郵箱:

    196099363@qq.com

掃碼關(guān)注我們

Copyright © 2024南京億迅生物科技有限公司 All Rights Reserved    備案號(hào):蘇ICP備2020061857號(hào)-1

技術(shù)支持:環(huán)保在線    管理登錄    sitemap.xml

服務(wù)熱線

025-65010873

掃碼添加微信

返回頂部

點(diǎn)